A. 基因工程試題
第一題 把抗性基因看做Aa的話 植株1和植株2都應該是Aa的 植株1雜交時 是 Aa與aa雜交 結果是 50%抗性 植株2雜交時應該時Aa與Aa結果就是75%抗性 如果野生型不可能表現抗性的話,就應該是質粒的問題了
B. 基因工程的高考題,求解
(1)在構建含反義多聚乳糖醛酸酶基因的表達載體時,若用Sma I與Pst I完全酶切含目的基因的DNA後,反應管中有_3種_片段。為了避免目的基因和載體在酶切後產生的末端發生任意連接,實際操作中,一般應選用限制酶__Pst I和Hind III _,分別同時對__目的基因和載體__進行切割。
(2)通過農桿菌轉化法,可將帶有目的基因的T-DNA(重組質粒)導入番茄細胞。導入番茄細胞的目的基因,通常插入到細胞核某一條染色體的DNA上,使目的基因的遺傳特性得以__在番茄體內表達__。上述途徑所獲得的番茄,其後代並非每一個個體都含目的基因,原因是 在形成配子的減數分裂過程中,染色體發生了等位基因的分離 。
(3) 為了檢測番茄細胞是否導入了目的基因,可以採用特定的DNA分子探針進行檢測,也可以向植物組織培養基中加入__氨苄青黴素__,以篩選獲得導入上述重組質粒的特定受體細胞。
(4) 向正常番茄細胞內導入反義多聚乳糖醛酸酶基因後,發現多聚乳糖醛酸酶基因能正常轉錄形成mRNA,但細胞內卻不再合成多聚乳糖醛酸酶(PG),其原因最可能是__多聚乳糖醛酸酶基因轉錄的mRNA被反義多聚乳糖醛酸酶基因轉錄形成的mRNA所降解(RNA干擾)_。
C. 基因工程方面的題
如果片段不長,可以用PCR進行突變
D. 大學基因工程考試,有三道大題求高手解答!急求!
4.以mRNA為模板,經反轉錄酶催化,在體外反轉錄成cDNA,與適當的載體(常用噬菌體或質粒載體)連接後轉化受體菌,則每個細菌含有一段cDNA,並能繁殖擴增,這樣包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織細胞的cDNA文庫。
原核生物沒有POLYA尾,不易進行反轉錄。
5.Mut+能夠快速利用甲醇為碳源,而Muts則不能利用甲醇為碳源。所以Mut+能夠在含甲醇(MM)平板也快速生長,而Muts只能在含葡萄糖(MD)平板快速生長。
6.切口平移法(nick translation)是利用大腸桿菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多種酶促活性將標記的dNTP摻入到新形成的DNA鏈中去,形成均勻標記的高比活DNA探針。其操作方法如下:
(1) 取1ug DNA溶於少量無菌雙蒸水中,加入5?l距離大約10×切口平移緩沖液 ( 0.5mol/L Tris-HCl,PH7.2;0.1 mol/L MgSO4 ;1mmol/L二硫蘇糖醇;500?g/mL牛血清白蛋白),加入除標記物(如?-32 p-datp)外的其它三種dNTP(如dCTP,dGTP,dTTP)溶液,20mmol/L溶液各1?l。
(2) 加入100?ci(10?l)標記物溶液,加入無菌雙蒸水至終體積為46.5ul,混勻,加入0.5ul稀釋的DNaseI溶液,混勻;加入1ul(約5單位)E.coli DNA polymerase I,混勻。
(3) 置14-16℃反應1-2小時。