A. 基因工程试题
第一题 把抗性基因看做Aa的话 植株1和植株2都应该是Aa的 植株1杂交时 是 Aa与aa杂交 结果是 50%抗性 植株2杂交时应该时Aa与Aa结果就是75%抗性 如果野生型不可能表现抗性的话,就应该是质粒的问题了
B. 基因工程的高考题,求解
(1)在构建含反义多聚乳糖醛酸酶基因的表达载体时,若用Sma I与Pst I完全酶切含目的基因的DNA后,反应管中有_3种_片段。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接,实际操作中,一般应选用限制酶__Pst I和Hind III _,分别同时对__目的基因和载体__进行切割。
(2)通过农杆菌转化法,可将带有目的基因的T-DNA(重组质粒)导入番茄细胞。导入番茄细胞的目的基因,通常插入到细胞核某一条染色体的DNA上,使目的基因的遗传特性得以__在番茄体内表达__。上述途径所获得的番茄,其后代并非每一个个体都含目的基因,原因是 在形成配子的减数分裂过程中,染色体发生了等位基因的分离 。
(3) 为了检测番茄细胞是否导入了目的基因,可以采用特定的DNA分子探针进行检测,也可以向植物组织培养基中加入__氨苄青霉素__,以筛选获得导入上述重组质粒的特定受体细胞。
(4) 向正常番茄细胞内导入反义多聚乳糖醛酸酶基因后,发现多聚乳糖醛酸酶基因能正常转录形成mRNA,但细胞内却不再合成多聚乳糖醛酸酶(PG),其原因最可能是__多聚乳糖醛酸酶基因转录的mRNA被反义多聚乳糖醛酸酶基因转录形成的mRNA所降解(RNA干扰)_。
C. 基因工程方面的题
如果片段不长,可以用PCR进行突变
D. 大学基因工程考试,有三道大题求高手解答!急求!
4.以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
原核生物没有POLYA尾,不易进行反转录。
5.Mut+能够快速利用甲醇为碳源,而Muts则不能利用甲醇为碳源。所以Mut+能够在含甲醇(MM)平板也快速生长,而Muts只能在含葡萄糖(MD)平板快速生长。
6.切口平移法(nick translation)是利用大肠杆菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新形成的DNA链中去,形成均匀标记的高比活DNA探针。其操作方法如下:
(1) 取1ug DNA溶于少量无菌双蒸水中,加入5?l距离大约10×切口平移缓冲液 ( 0.5mol/L Tris-HCl,PH7.2;0.1 mol/L MgSO4 ;1mmol/L二硫苏糖醇;500?g/mL牛血清白蛋白),加入除标记物(如?-32 p-datp)外的其它三种dNTP(如dCTP,dGTP,dTTP)溶液,20mmol/L溶液各1?l。
(2) 加入100?ci(10?l)标记物溶液,加入无菌双蒸水至终体积为46.5ul,混匀,加入0.5ul稀释的DNaseI溶液,混匀;加入1ul(约5单位)E.coli DNA polymerase I,混匀。
(3) 置14-16℃反应1-2小时。